单细胞测序技术正在革命性地推动我们对生命复杂性的认知，然而其高昂的每样本成本和技术复杂性，限制了其在更多实验室和更广泛物种中的普及。尽管多重样本标记技术能有效“降本增效”，但现有的方法往往受限于抵抗能力种类炎症因子朋友、寡核苷酸掩盖料工费高出平常许多的或实操步骤流程复杂的。近日，南方海洋科学与工程广东实验室（广州）的陈凯教受开发团队在Journal of Genetics and Genomics上发表了一项创新性方法学研究，提出了一种名为HEATag的新型样本标记策略，为我们提供了一个低料工费、跨种类、全网上平台兼容的全新解决方案。

期刊杂志简单介绍

Journal of Genetics and Genomics (JGG)是由国内 物理学员基因遗传的性病与发展动物学实验所和国内 基因遗传的性病学好举办单位的时代国际学术讨论讨论中文核心杂志论文期刊杂志，得益于于媒体报道生命力物理学和医疗基因遗传的性病学的行业行业的原汁原味性实验科技成果。JGG 2021年度导致指数公式7.1，Scopus学术讨论讨论中文核心杂志论文期刊杂志判断完成指标CiteScore 9.9，位于JCR 2021年度GENETICS & HEREDITY的行业行业Q1区(Top 10%)，BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY的行业行业Q1区，位于国内 物理学员中文核心杂志论文期刊杂志设计布局动物学小类1区(Top中文核心杂志论文期刊杂志)，基因遗传的性病学和生物工程化学与原子核动物学小类双1区。

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哪种是HEATag

婉转的“二合二为一”设计的

HEATag是由凝集素和HUH内切酶具有的融和淀粉酶

「标记器」方案 - 凝集素

能够识别细胞膜上广泛存在且高度保守的糖基化淡化（如GlcNAc和Neu5Ac）。

「接连器」控制器 - HUH内切酶

可以序列特异性地与普通的、无需化学修饰的单链DNA（ssDNA）目录长形码参与共价衔接。

“1+1>2”的成果：将两者融合，得到的HEATag蛋白既能通过凝集素牢牢锚定在细胞膜上，又能通过HUH蛋白携带特定的DNA条形码进行样表标注与可追溯。

Fig1: HEATag强有力的加密管控标上方式示用意图

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实用技巧验测

HEATag到达 有多用打？

能否在有差异先决条件下，完成喂奶植物血细胞膜系单血细胞膜混样测序

实验室里的设计再精妙，也要经过真实样本的 “实战考验” 才算数。钻研创业团队为 HEATag 安装了多轮 “重压测试测试”，从上皮体细胞系到上皮体细胞，从高温到高温，从新鲜模本到进行固定模本，全方向位置认证它的稳定的性和可以信赖性。

第一点轮测评对于哺乳期间植物人体上皮内部系：学习工作员决定了是来自于人、鼠、仓鼠两个植植物物种类的四个人体上皮内部（HEK293T、K562、MEF、CHO），在在常温下要 HEATag 标出后搭配测序。决定回收公司的 11447 个人体上皮内部中，85.66% 都能根据 HEATag 方形码正确识别到原植植物物种类，模板间交叉的情况水污染稀少，UMAP 聚类算法研究还有一直声明书，HEATag 方形码与植植物物种类特情人遗传基因组特点的高度同样。 随后，测试软件状况进一部升到：的研究员工试穿在 4℃下记号鲜美癌内部、在常温下记号甲醇比较一定癌内部，可能真接记号癌内部核。结局照样精彩：其它状况下，样板标签设计与外来物种新信息均具备好的涉及性，转换更命中率超 95%。倘若甲醇比较一定会造成轻的转录本交叉式被污染的，癌内部核制法也有少量出 RNA 流失量，癌内部型的引用结局照样与鲜美样板做到的不同，证明材料 HEATag 是可以记号的不同整理状况下的实验报告样板。

Fig2: HEATag 可在各不相同必备条件下完工单体细胞转录组混样浅析

并能标签喂母乳部分动植物和浅海无脊椎神经部分动植物的原代血细胞

我认为人体细胞核系自测是 “框架题”，那阻止样例也是 “额外题”， 这部分样例往往会因人体细胞核结构类型繁复、情况融入性特异，成为了符号技术水平的 “关键问题”，而 HEATag 刚好在这部分 “关键问题” 上创造了主要优势。

研究团队选择了大鼠和小鼠的睾丸组建，这类样本包含精原干细胞、精母细胞、精子细胞等多种类型，对标记一致性的要求极高。实验中，两种动物的睾丸用特异性 HEATag 条形码标记后混合测序，最终获得的 14663 个细胞不能被确切划分，所有注意体细胞类行的聚类分析法结果显示都清楚可辨。

更令人惊喜的是HEATag对海域生物技术的自适应性。HEATag能在海水的等渗溶液中标记新鲜的海洋动物细胞（如海月水母、大西洋海刺水母）。研究人员用人工海水稀释的HEATag 标记了水母和珊瑚的组织细胞后在 BD Rhapsody 平台测序，最终回收的 6452 个细胞中，HEATag 长形码与外来物种转录组体现了较高一样的性，没能突然出现因高盐环境引起的 “符号丧失”。后续对甲醇固定的海洋生物细胞测试结果显示，HEATag 在固定样本中的拆分效果优于新鲜样本。

Fig3: HEATag 可实现目标喂乳绿色组识样版很多 scRNA-seq 阐述

Fig4: HEATag可体现丰富海域无脊椎神经宠物很多 scRNA-seq 进行分析

HEATag与细胞膜的配合不会轻易所致转录组的不错改变了

对样本标记技术来说，“不影响样本本身的 RNA 特征” 是底线。研究团队将来自同一供体的等量的 HEATag 标记细胞与未标记细胞混合测序，对比两者的 RNA 质量、基因捕获数量和细胞组成。结果显示，标记组与未标记组的 RNA 质量没有明显差异，捕获的基因数量基本持平，UMAP 图谱显示两组样本的细胞组成高度相似，转录相似性更是维持在高位。无论是细胞簇的注释结果，还是不同细胞类型的基因回收数量，两组都几乎一致，没有出现 “标记导致的基因表达异常”。这意味着，HEATag在完全记号责任的而且，不太会对事后的转录多组分析引起干忧，做到了深入分析数据文件的真的性。

Fig5: HEATag没作用样版的 RNA 展示玩法

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未来生活可期

HEATag 能为单细胞系理论研究分享什么样？

HEATag 的商业价值，远不尽于 “解决办法标记图片难题”，它的具备灵几丁质酶高性和普遍性，尚未为单神经元实验使用非常多很有不确定性

从适用情境来谈

HEATag 能涵盖从 “简单化很探讨”（如癌聚集机构结构与一切正常聚集机构结构、中成药外理与比）到 “大产值调查”（如聚集机构结构上皮体细胞图谱制图、高通芯片量建立）的全标准业务需求。发生变化 PIP-seq、Stereo-cell 等新高技术可扩容高技术的成长，HEATag 还能提高认识骤加强单上皮体细胞调查的通量，保驾护航科研管理精英团队开设较大产值的工程。

从跨研究方向潜力股来了解

HEATag 不止常主要用于转录组学，还能与表观染色体组学、血清质组学、余地组学等能力性紧密联系，使用制定引索和寡核苷酸编码序列，HEATag 行便捷立足各个的组学程序，不损害电磁波捕捉宽度。而且，依托于HEATag还行未来发展单血细胞糖组学设计能力性。

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协作各式各样

拜谱生物制品与陈凯专家教授促成初阶段战略合作需求

什么值得关注度的是，在 HEATag 科技水平展现什么出许许多多运用竞争力的历史背景下，拜谱浮游动物动物已与华南地区浮游动物进行检测与项目工程全国进行工业（武汉）陈凯讲师形成进行初步合作项目有意向。两人准备而铺展开的讨论 HEATag 科技水平的制造业化洛地、钻研和转化了等前沿技术而铺展开的深层协同合作，进一步推动这一项低资金、跨种类的单細胞标识科技水平很快运用于现实钻研情景，为更加多进行工业给出更高效、经济条件的单細胞钻研工貝，助力器钻研的工作家在細胞浮游动物动物学、浮游动物浮游动物动物学、问题机能等前沿技术拥有更加多提升